Calcium-dependent inactivation of neuronal calcium channel currents is independent of calcineurin

摘要

Ca2 + /钙调蛋白依赖性磷酸酶钙调磷酸酶的去磷酸化已被认为是电压门控Ca2 +通道的Ca2 +依赖性失活的重要机制。我们使用免疫抑制药物FK506（他克莫司）测试了钙调神经磷酸酶是否在中枢神经系统中广泛表达的两种类型的高电压激活的Ca2 +通道（L和N型）的失活过程中起作用，该药物可抑制钙调神经磷酸酶与细胞内FK506结合蛋白结合。分别在大鼠垂体瘤细胞系（GH3）和鸡背根神经节神经元中研究了L型和N型Ca2 +通道的失活。使用针对钙调神经磷酸酶亚基B和12,000mol的抗血清。 wt结合蛋白，我们表明这两种蛋白都存在于GH3细胞和鸡背根神经节神经元的细胞质中。在膜片钳技术的穿孔膜片和全细胞配置中研究了通过电压门控Ca2 +通道的离子电流。 L型和N型Ca2 +电流的失活可以很好地拟合双指数函数。当Ba2 +替代细胞外Ca2 +或当Ca2 +螯合剂EGTA存在于细胞内时，失活程度大大降低，表明这两种类型的Ca2 +电流均表现出Ca2 +依赖性失活。 FK506的细胞外（穿孔膜配置）或细胞内（整个细胞配置）的应用使钙调神经磷酸酶失活，对L型或N型Ca2 +通道的Ca2 +通道电流失活的幅度和时程没有影响。此外，我们发现FK506不会影响N型Ca2 +通道电流的失活和流失。我们的结果提供了直接的证据，表明钙依赖性酶钙调磷酸酶不参与两种Ca2 +通道类型的失活过程，这两种通道对于神经元功能（如基因表达和递质释放）很重要。